Những lưu ý khi sử dụng cột HPLC – WATERS

1. Lắp đặt cột

• Thanh lọc hệ thống bơm của bất kỳ pha động nào chứa bộ đệm và kết nối đầu vào của cột với ổ cắm phun. Một mũi tên trên nhãn nhận dạng cột cho biết hướng chính xác của dòng dung môi.
• Cột xả với pha động 100% hữu cơ (methanol hoặc acetonitrile) bằng cách đặt tốc độ dòng thành 0,1 ml/phút và tăng tốc độ dòng 1 ml/phút trong hơn 5 phút.
• Khi pha động đang chảy tự do từ đầu ra của cột, dừng dòng và nối với đầu vào của detector. Điều này ngăn sự xâm nhập của không khí vào detector và cân bằng đường nền nhanh hơn.
• Dần dần tăng tốc độ dòng chảy như được mô tả trong bước 2.
• Sau khi đạt được áp suất ngược và đường nền ổn định, tiến hành phần tiếp theo.

2. Cân bằng cột

• Đảm bảo kết nối cột và thay cột đúng quy trình
• Cân bằng cột bằng pha động được sử dụng, với thể tích tối thiểu 10 lần thể tích cột
• Cân bằng cột kết thúc khi áp suất ngược đạt giá trị ổn định.
• Để tránh kết tủa đệm trên cột hoặc trên hệ thống, cân bằng cột với tối thiểu 5 lần thể tích cột của hỗn hợp pha động nước/hữu cơ, trước khi cân bằng với tỷ lệ pha động có chứa đệm
• Cách tính thể tích trống của cột:

V = 3.14 x r² x L, đơn vị: cm³, trong đó: r – bán kính cột, L – chiều dài cột

• Ví dụ: Cân bằng cột với 60% methanol: 40% nước trước cân bằng với 60% Methanol: 40% dung dịch đệm)

(Bảng tính thể tích cột)

3. Rửa cột

Khuyến cáo rửa cột của Waters:

• Rửa bằng dung môi hữu cơ tinh khiết, cẩn thận để không làm xuất hiện kết tủa trong dung dịch đệm, thường là đủ để loại bỏ sự nhiễm bẩn trong cột.
• Rửa cột với thể tích gấp 20 lần thể tích cột. Tăng nhiệt độ cột tới 35-55˚C sẽ tăng hiệu quả làm sạch.
• Lưu ý rửa cột cuối ngày cần thực hiện sau khi rửa máy.

4. Bảo quản cột

• Trong thời gian dài hơn 4 ngày ở điều kiện nhiệt độ phòng, bảo quản cột trong 100% ACN
• Đối với các ứng dụng ở nhiệt độ cao, bảo quản cột ngay sau khi sử dụng trong 100% ACN để tuổi thọ cột đạt tốt nhất
• Không bảo quản cột trong đệm
• Nếu pha động chứa muối đệm hoặc phụ gia, rửa cột trước bằng nước, sau đó thay bằng ACN để bảo quản (tối thiểu 15 lần thể tích cột)
• Khi không thực hiện bước trung gian này (rửa giải bằng H2O), có thể gây ra kết tủa dung dịch đệm trong cột khi rửa cột bằng 100% ACN
• Đóng kỹ cột để tránh bay hơi và khô cột.

Hy vọng thông tin hữu ích trên sẽ giúp Quý Anh/ chị sử dụng cột đúng cách nhất. Mọi thắc mắc xin vui lòng liên hệ team NaVi để được hỗ trợ kịp thời.

Tel: 024.7309.2022 – 028.7308.2022
Website: www.navist.vn