Tuy đã có những tiến bộ về các phương pháp và công nghệ, HPLC vẫn còn những vấn đề có thể phát sinh mỗi khi sử dụng hệ thống này. Nội dung dưới đây đề cập đến những vấn đề phổ biến nhất của HPLC và cách khắc phục chúng.

1. Vấn đề liên quan đến áp suất

Những vấn đề cơ bản với áp suất bao gồm:

• Áp suất bất thường, có nghĩa là không có dòng chảy do hệ thống không được cung cấp điện, xảy ra khi có sự rò rỉ hoặc không khí bị kẹt trong đầu bơm, có vấn đề với cài đặt bộ điều khiển hoặc piston bị hỏng. Nếu có dòng chảy và áp suất, nguyên nhân có thể nằm ở đồng hồ hoặc bộ chuyển đổi áp suất, và cần được thay thế.
• Áp suất ngược cao, thường là do tốc độ dòng quá cao. Cũng có thể là do tắc nghẽn màng lọc của cột sắc ký, cột bảo vệ, bơm tiêm hoặc bộ lọc nội tuyến; sử dụng sai cột sắc ký hoặc sai pha động; nhiệt độ cột thấp; hoặc bộ điều khiển bị lỗi.
• Áp suất ngược thấp, thường là do tốc độ dòng quá thấp. Những nguyên nhân khác có thể dẫn đến vấn đề này như sử dụng cột sắc ký không phù hợp, nhiệt độ cột quá cao, hệ thống bị rò rỉ và bộ điều khiển bị lỗi.
• Áp suất không đều, có thể do có không khí trong máy bơm, van bị lỗi, hệ thống bị rò rỉ, pump seal bị hỏng, loại khí không hoàn toàn hoặc sử dụng chương trình rửa giải gradient.

2. Vấn đề liên quan đến sự rò rỉ

Sự rò rỉ có thể xảy ra ở bất cứ đâu trong hệ thống HPLC.

• Rò rỉ tại đầu nối, điều này nghĩa là đầu nối cần được siết chặt, vệ sinh hoặc thay thế khi đầu nối hao mòn hoặc hư hỏng. Các vấn đề khác như siết đầu nối quá chặt hoặc sử dụng các bộ phận từ các nhà sản xuất khác nhau.
• Rò rỉ tại bơm, có thể là do đầu nối hoặc van bị lỏng và cần được siết chặt lại. Cũng có thể có sự cố ở mixer seal, pump seal, bộ giảm xung hoặc van điều chỉnh. Các bộ phận bị lỗi cần được sửa chữa hoặc thay thế.
• Rò rỉ tại bơm tiêm, có thể do sử dụng kim tiêm sai đường kính. Rotor seal bị hỏng cũng có thể gây rò rỉ, cần được sửa chữa hoặc thay thế. Tắc nghẽn có thể xảy ra trong vòng lặp hoặc tại đường dẫn thải, cần được vệ sinh hoặc thay thế. Nếu seal của cổng bơm bị lỏng, siết chặt lại. Rò rỉ khi xảy ra do xi-phông của đường dẫn thải, có thể được sửa chửa với độ dốc phù hợp và giữ đường thải nằm trên bề mặt.
• Rò rỉ tại cột sắc ký, có thể do đầu nối bị lỏng, cần được siết chặt lại.
• Rò rỉ tại đầu dò, có thể do đầu nối bị rò rỉ cần siết chặt, cell gasket bị hỏng, hoặc bị nghẽn đường dẫn thải, flow-cell, cần phải thay thế những bộ phận này.

3. Vấn đề liên quan đến sắc ký đồ

Các vấn đề có thể xảy ra có thể xuất phát từ cột HPLC

• Peak kéo đuôi do tắc nghẽn màng lọc, khoảng trống trong pha tĩnh ở phía đầu cột, tương tác của mẫu với pha tĩnh, xuất hiện pic gây nhiễu, pH pha động không phù hợp hoặc sử dụng sai cột. Để khắc phục cần xác định và thay thế các nguyên nhân tương ứng.
• Peak kéo đầu do nhiệt độ thấp, sử dụng sai dung môi pha mẫu, lượng mẫu quá lớn hoặc cột hết tuổi thọ. Để khắc phục cần xác định và thay thế các nguyên nhân tương ứng.
• Peak bị chẻ do đầu cột sắc ký, cột bảo vệ bị nhiễm hoặc sử dụng dung môi pha mẫu không tương thích với pha động.
• Peak lớn bị biến dạng do quá tải mẫu
• Peak nhỏ bị biến dạng do sử dụng sai dung môi tiêm
• Kéo đuôi ở các Peak xuất hiện sớm do các vấn đề bên ngoài cột. Để khắc phục cần sử dụng các tế bào của đầu dò có thể tích nhỏ hơn hoặc sửa lại hệ thống dẫn của thiết bị HPLC (sử dụng ống ngắn hơn, hẹp hơn)
• Kéo đuôi nhiều hơn khi k’ tăng do các ảnh hưởng của các tương tác thứ cấp
• Kéo đuôi ở các Peak acid hoặc base do sử dụng dung dịch đệm không tương thích.
• Thừa peak do sự xuất hiện của các pic ma hoặc các pic rửa giải muộn từ mẫu của lần đo trước (nhiễm chéo).
• Thời gian lưu bị trôi do không kiểm soát tốt nhiệt độ hoặc thay đổi điều kiện ổn định cột, pha động.
• Thời gian lưu thay đổi do sự thay đổi tốc độ dòng, xuất hiện bong bóng khí trong bơm hoặc sử dụng sai pha động.
• Trôi đường nền do pha động nhiễm tạp, nhiệt độ cột dao động, ổn định cột chậm, các vấn đề liên quan đến pha động, mẫu mang theo tạp hoặc đầu dò được cài đặt không đúng.
• Nhiễu đường nền do sự rò rỉ, xuất hiện không khí trong hệ thống, nhiễm tạp, pha động được trộn, khử khí không hoàn toàn, các vấn đề về đầu dò, nhiệt độ, xung của máy bơm, hoặc sử dụng cùng đường dây với thiết bị điện tử khác.
• Peak bị bè do các vấn đề của pha động, nhiệt độ, cài đặt đầu do; bị rò rỉ, nhiễm tạp trong cột sắc ký, cột bảo vệ, nồng độ dung dịch đệm thấp, đầu dò phải làm việc trong thời gian dài hoặc xuất hiện khoảng trống pha tĩnh ở đầu cột.
• Mất độ phân giải do pha động bị nhiễm tạp, sự cản trở của cột phân tích hay cột bảo vệ hoặc cột hết tuổi thọ.
• Peak quá nhỏ hoặc quá lớn do các vấn đề về tín hiệu đầu dò, cỡ mẫu hoặc bộ phận ghi tín hiệu không được kết nối đúng cách

Công ty Nam Việt là nhà phân phối ĐỘC QUYỀN các loại vật tư tiêu hao, phụ kiện sắc ký của hãng Waters và đại diện cho Waters phục vụ thị trường Việt Nam trong 20 năm qua.

Tel: 024.7309.2022 – 028.7308.2022
Website: www.navist.vn